產(chǎn)品上新 | 鎂孚泰高特異性MMLV反轉(zhuǎn)錄酶篩選試劑盒重磅上市，精準(zhǔn)RNA研究必備利器！

在生命科學(xué)研究的前沿領(lǐng)域，反轉(zhuǎn)錄技術(shù)作為一種關(guān)鍵手段，為我們深入探索遺傳信息的奧秘提供了強(qiáng)大助力。反轉(zhuǎn)錄過程打破了傳統(tǒng)中心法則中 “DNA→RNA→蛋白質(zhì)” 的單向流動(dòng)認(rèn)知，揭示了遺傳信息從 RNA 反向傳遞至 DNA 的可能性。這一過程需要一種特殊的酶——反轉(zhuǎn)錄酶，它能夠以 RNA為模板合成cDNA。在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，反轉(zhuǎn)錄酶的質(zhì)量直接決定了cDNA的質(zhì)量，從而影響后續(xù)克隆、PCR、qPCR和測序等實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。

圖1.中心法則。

在自然界中，存在多種反轉(zhuǎn)錄酶，其中莫洛尼鼠白血病病毒（Moloney Murine Leukemia Virus，MMLV）的反轉(zhuǎn)錄酶和禽成髓細(xì)胞瘤病毒（Avian Myeloblastosis Virus，AMV）的反轉(zhuǎn)錄酶是最常用的兩種。尤其是 MMLV反轉(zhuǎn)錄酶，因其RNase H 活性弱，合成長度長，合成量高等特性，特別適合克隆，PCR等分子生物學(xué)技術(shù)。

反轉(zhuǎn)錄酶具有多種生化活性，包括RNA依賴的DNA聚合酶活性（RNA-dependent DNA polymerase，RDDP）、DNA依賴的DNA聚合酶活性（DNA-dependent DNA polymerase，DDDP）、RNase H活性以及末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal deoxynucleotidyl transferase，TdT）活性等。其核心功能在于RDDP活性，能夠以RNA為模板合成互補(bǔ)的DNA鏈（即第一鏈cDNA）。而DDDP活性通常相對較低，這意味著在沒有RNA模板的情況下，其合成DNA的能力較弱。這種特性使得反轉(zhuǎn)錄酶在以RNA為模板進(jìn)行cDNA合成時(shí)具有更高的特異性和準(zhǔn)確性，減少了非特異性產(chǎn)物的生成。對高特異的要求較高的應(yīng)用，這種特性顯得尤為重要。例如，在RNA測序（RNA-Seq）應(yīng)用中，這種特性有助于確保合成的cDNA準(zhǔn)確代表原始RNA，從而提高測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量。

圖2.反轉(zhuǎn)錄酶的結(jié)構(gòu)圖。

基于對高質(zhì)量反轉(zhuǎn)錄酶的需求，鎂孚泰生物憑借ZymeEditor定向進(jìn)化平臺，特別開發(fā)了一款高特異性 MMLV反轉(zhuǎn)錄酶篩選試劑盒（Cat.No.LT001-01）。這款試劑盒包含10種高特異性反轉(zhuǎn)錄酶突變體，它們在野生型反轉(zhuǎn)錄酶的基礎(chǔ)上，通過定向進(jìn)化技術(shù)改造獲得，具有更高RDDP活性和更低 DDDP活性。這樣的特性組合，使其在反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)中能夠精準(zhǔn)地完成任務(wù)，有效降低非特異性產(chǎn)物的生成，特別適用于對反應(yīng)特異性要求嚴(yán)苛的反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)。

圖3.鎂孚泰生物 ZymeEditor 平臺五大酶改造技術(shù)。

如圖4數(shù)據(jù)所示，與野生型（Wild type，WT）相比，鎂孚泰高特異性MMLV反轉(zhuǎn)錄酶篩選試劑盒（Cat.No.LT001-01）中10種酶的DDDP/RDDP活性比值均顯著降低，其中部分突變體的DDDP/RDDP活性比值僅為WT的20%以下，展現(xiàn)了突變體在特異性提升方面的顯著優(yōu)勢。

圖4.以WT的DDDP/RDDP活性的比值為100%，鎂孚泰高特異性MMLV反轉(zhuǎn)錄酶篩選試劑盒（Cat.No.LT001-01）10種酶相對WT的DDDP/RDDP活性比值數(shù)據(jù)圖。